Implementación del estudio farmacogenético de hipersensibilidad al abacavir HLA-B*5701 en Argentina / Implementation of pharmacogenetic study HLA-B*5701 to predict abacavir hipersensitivity in Argentina

El abacavir (ABC) es un antirretroviral inhibidor de la transcriptasa reversa del virus HIV-1 que está fuertemente asociado al desarrollo de reacciones de hipersensibilidad en individuos portadores del alelo HLA-B*5701. Objetivos: determinar la prevalencia del alelo HLA-B*5701 en pacientes HIV-1 positivos y en una población control de Argentina. Materiales y métodos: desde enero de 2012 hasta octubre de 2013 se estudiaron 869 pacientes HIV-1 positivos y 63 individuos no infectados con HIV-1. La detección del alelo HLA-B*5701 se realizó mediante un ensayo in house basado en la técnica de PCR en tiempo real, diseñado en nuestro laboratorio y validado según guías internacionales. Resultados: el primero de enero se implementó el estudio farmacogenético para la detección de hipersensibilidad al ABC en los pacientes incluidos en el Programa VIH/sida de la Dirección de SIDA y ETS, y en los niños infectados con HIV-1 del Hospital Garrahan. Para ello se adoptó un protocolo de envío, recepción y procesado de las muestras, con un informe detallado de los resultados. El alelo HLA-B*5701 se detectó en 42 individuos infectados con HIV-1 y en 3 individuos no infectados. Conclusiones: la prevalencia del alejo HLA-B*5701 en la población de pacientes infectados con HIV-1 y la población control fue la misma (4,8%), lo cual sugiere que la presencia de este alelo no influye en la infección por HIV-1. Esta prevalencia fue similar a la reportada para otras poblaciones de origen caucásico...

Relevancia del CCR5 co-receptor del HIV-1 y su ligando CCL3L1 en el tropismo viral en pediatría / Relevance of the CCR5 co-receptor of HIV-1 and its ligand CCL3L1 in viral tropism in pediatrics

El objetivo del trabajo fue determinar la participación del coreceptor CCR5 y su ligando CCL3L1 en relación a una de las características del fenotipo del HIV-1, el tropismo viral. Los resultados que obtuvimos así como otras investigaciones que estamos desarrollando tienen implicancias clínicas y terapéuticas en los niños HIV-1 infectados. Para lograr el objetivo hemos evaluado en forma conjunta y combinada los datos que habíamos obtenido a lo largo de casi 15 años en relación a las variantes genéticas del CCR5, en particular la mutación Δ32 y su ligando CCL3L1 en función del número de copias del gen en los niños HIV-1 infectados por transmisión vertical que son asistidos en el Hospital Garrahan, investigando la probable asociación de ellas con el tropismo viral. Hallamos que los niños en primoinfección tienen una proporción considerable de variantes HIV-1 SI que emplean como co-receptor al CXCR4 en lugar del CCR5. Otro hecho relevante fue que la presencia de las variantes SI predominaron en los niños heterocigotas para la variante genética CCR5Δ32. En este último grupo encontramos además que estaba significativamente asociado con un número de copias del CCL3L1 alto (≥2). Probablemente ambos factores participan favoreciendo la reducción en el número de moléculas del co-receptor CCR5 expresadas en la superficie celular facilitado la infección por las variantes X4. Aunque las variantes SI en la etapa crónica alcanzan a un 40% no parecieran asociadas con el genotipo CCR5Δ32 ni con el número de copias del CCL3L1. En resumen, hemos demostrado que las variantes SI X4 T-trópicas del HIV-1 pueden estar presentes en los estadios muy tempranos de la infección viral sugiriendo que puede ser transmisible verticalmente. Además, el genotipo CCR5Δ32 en el contexto de copias altas del CCL3L1 en el niño HIV-1 infectado, contribuyen a un mayor riesgo a ser infectado por variantes SI en primoinfección. Este hecho no pareciera suceder en la etapa crónica de la infección viral.

The aim of the study was to assess the role of co-receptor CCR5 and its ligand CCL3L1 in viral tropism, one of the char-acteristics of the HIV-1 phenotype. The results of this study as well as those found in our other ongoing research have clini-cal and therapeutic consequences for HIV-1 Infected children. For the aim of the study we collected and evaluated the data obtained over a period of almost 15 years on genetic variants of CCR5, specially the 32 mutation and its ligand CCL3L1 (MIP-1 P), in relation to the number of copies of the gene in HIV-1-mother-to-child infected children seen at the pediatric hospital J.P. Garrahan, to investigate a probable association with viral tropism. We found that children with a primary in-fection have a considerable number of HIV-1 SI (syncytium-inducing, i.e. cytopathic) variants that use CXCR4 instead of CCR5 as a co-receptor. Another relevant finding was that SI variants were predominant in children that were homozygous for the genetic CCR5 32 variant. In this latter group we additionally found that this was significantly associated with a high number of CCL3L1 copies ( 2). Both factors may play a favorable role in the decrease of the number of molecules of the CCR5 co-receptor expressed on the cell surface that facilitate infection through X4 variants. Although in the chronic stage SI variants reach 40%, they do not seem to be associated with either the CCR5 32 genotype or the number of CCL3L1 copies. In sum-mary, we have shown that SI X4 T-tropic variants of HIV-1 may be present in very early stages of viral infection suggesting that they may be transmitted from mother to child. In addition, the CCR5 32 genotype in the setting of a high number of CCL3L1 copies in an HIV-1 infected child contribute to a higher risk of being infected by SI variants in primary infection, however, this mechanism does not seem to occur in the chronic stage of viral infection.

Factores virales y celulares que afectan la transmisión vertical del HIV-1 / Viral and cellular factors affecting vertical transmission of HIV-1

Distintos factores virales y celulares pueden condicionar la susceptibilidad a la infección por el HIV-1. La inmunidad innata constituye la primera línea de defensa contra el virus jugando un papel fundamental en la etapa temprana de la transmisión del HIV-1 previo al desarrollo del sistema inmune adaptativo. Está constituida por elementos celulares como las células NK, granulocitos, macrófagos, células dendríticas, etc. y solubles como quimioquinas, defensinas y proteínas de unión a azúcares (lectinas) capaces de ejercer actividad antiviral. Se ha demostrado que variaciones genéticas de componentes de la respuesta inmune pueden modificar el riesgo de transmisión del HIV-1 y desarrollo de sida. Entre ellos se encuentran primordialmente los co-receptores del virus CCR5 y CXCR4, y las proteínas del complejo mayor de histocompatibilidad clase I y II. Además, características biológicas y evolutivas del HIV-1 pueden modificar el riesgo de la transmisión viral.

Viral and cellular factors may condition susceptibility to HIV-1 infection. Innate immunity represents the fist line of defense against the virus with mayor relevance at initial stages of HIV-1 transmission prior to the development of the adaptative immune system. Cellular components, such as, NK cells, granulocytes, macrophages, dendritic cells, etc and soluble factors like chemokines, defensins and sugar binding proteins (lectins) have antiviral activity. Genetic variations of immune response components can modify the risk of HIV-1 transmission and AIDS development. These mainly include viral co-receptors CCR5 and CXCR4 and HLA class I and II. Furthermore, biologic and evolutionary characteristics of HIV-1 can modify the risk of viral transmission.

Usefulness of a Nested-polymerase chain reaction for molecular diagnosis of human T-cell lymphotropic virus type I/II

This study aimed at implementing a Nested-polymerase chain reaction (Nested-PCR) for the molecular diagnosis of human T-cell lymphotropic virus type I/II (HTLV-I and HTLV-II) infections in peripheral blood mononuclear cells of infected subjects in Argentina. The sensitivity and specificity of the assay for the detection of regional strains were assessed by comparing them with the molecular assay of reference PCR-hybridization. The Nested-PCR detected 1 MT-2 cell ( 8 proviral copies)/1x106 non-infected cells showing high sensitivity for provirus detection. While both molecular assays showed high specificity (100 percent) for HTLV-I and HTLV-II detection, the sensitivity values differed: 100 percent for Nested-PCR and 67 percent for PCR-hybridization assay. Moreover, this technique showed less sensitivity for the detection of DNA sequences of HTLV-II (33 percent) than for the detection of DNA sequences of HTLV-I (75 percent). The high sensitivity and specificity of the Nested-PCR for regional strains and its low costs indicate that this assay could replace the PCR-hybridization assay for the molecular diagnosis of HTLV-I/II infections. It will be interesting to assess the usefulness of this assay as a tool for the molecular diagnosis of HTLV-I/II infections in other developing countries. Other studies that include a greater number of samples should be conducted.

La hiperprolactinemia es un hallazgo frecuente en infectados por HIV pero no se correlaciona con la carga viral / Hyperprolactinemia is frequently observed in HIV infection but does not correlate with viral burden

Aunque algunos autores han comunicado hiperprolactinemia durante la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV), las circunstancias que determinan el aumento de las concentraciones de prolactina (PRL) en sangre son poco conocidas. Con el objetivo de estudiar la relación entre PRL en suero y otras variables clínicas en infectados por el HIV se estudiaron 46 infectados y 17 controles seronegativos. Las concentraciones de PRL en suero fueron significativamente mayores en el grupo de infectados por el HIV (p = 0.022; Prueba de la U de Mann Whitney), y exhibieron algún grado de correlación con el título de IgG en suero (Rs = 0.42; p = 0.05, Spearman-Rank). Por el contrario, los valores de PRL en suero no guardaron correlación alguna con la carga viral de ARN-HIV-1 plasmática (Rs = 0.039; p = 0.841, Spearman-Rank). Estos datos confirman el frecuente hallazgo de hiperprolactinemia en el curso de la infección causada por el virus HIV con independencia de la tasa de replicación viral. Tomando en cuenta el cierto grado de correlación existente entre inmunoglobulinas y PRl en suero es posible hipotetizar que la concentración de PRL en sangre podría elevarse en respuesta a estímulos provenientes del sistema inmunológico, como activación inmune inespecífica o secundaria a infecciones severas.

Propiedades inmunologicas de la prolactina / Immunological properties of prolactin

La prolactina (PRL) mantiene una marcada interacción bi-direccional con el sistema inmunológico: Estimula la proliferación linfocitaria, estimulando de este modo la respuesta inmune, mientras que sus propias acciones biológicas se hallan bajo el control de citoquinas capaces de modificar la concentración plasmática de PRL. Estos efectos recíprocos implican la presencia de receptores específicos para PRL, presentes en la membrana celular de numerosas clases de linfocitos y células accesorias. La unión de PRL a estos receptores estimula la síntesis y secreción de citoquinas linfocitarias y es un factor de crecimiento esencial para al menos una línea celular linfoide y células accesorias. También se ha demostrado la presencia del mensajero correspondiente a PRL en el citoplasma de linfocitos estimulados por mitógenos, y se ha documentado la efectiva secreción de PRL por células linfoides. La PRL actúa sobre las células NK induciendo su diferenciación hacia células killer activadas por PRL (células PAK) de un modo dosis dependiente (activación a concentraciones fisiológicas e inhibición de la citotoxicidad a concentraciones 10 veces superiores). Además de actuar como un factor de diferenciación de células PAK, la PRL parece modular el efecto promotor de células LAK de la IL-2, y es un potente inductor de la síntesis de interferón gamma e IL-2, lo que sugiere su participación en la génesis de respuestas Th1. Este repertorio de propiedades inmunológicas hace que la PRL sea actualmente considerada como una citoquina, y su participación en la respuesta inmune normal y en numerosos procesos patológicos plantea un importante espectro de potenciales aplicaciones terapéuticas.

In acute lymphoblastic leukemia deletion of the tumor suppressor gene P16 is associated with abnormal interferon genes

The putative tumor-suppressor gene p16 was mapped to human chromosome 9p21, close to the interferon alpha cluster. The frequency and association of gene alterations of p16, interferon alpha and interferon beta were investigated in a total of 39 Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) patients. Of these, 10 patients (25.6 per cent) presented abnormalities of at least one of the three genes studied. In 32 ALL cases studies of the three genes could be accomplished. In 23 out of 32 ALL cases the 3 genes studied were normally preserved. In the remaining 9 ALL, p16 was affected in 8 cases by homozygous deletions. In 2 patients, p16 deletion was associated with homozygous deletions for interferon alpha and interferon beta genes and in 1 case with total deletion of interferon beta 1 gene and partial deletion of interferon alpha. In the remaining 5 cases, p16 was the only gene deleted with no alteration of type interferon genes. These data indicate that p16 gene is deleted in a higher frequency than type I interferon genes in ALL. Moreover, within the ALL group with p16 gene deletion, 37.5 per cent are associated with interferon deletions and in general, ALL with alpha and/or beta interferon gene deletions are associated with p16 deletions. Therefore, p16 gene deletion with preserved type I interferon genes in some ALL suggests that the absence of this cdk inhibitor may disturb the normal cell cycle and favor blast transformation.

Impaired monocyte function in patients succesfully treated for Wipple's disease

Peripheral blood mononuclear cells (monocytes) from patients with Whipple's disease in long-term remission were tested for their ability to handle intracellular microorganisms. Phagocytosis and lysis of Candida tropicalis by monocytes of patients (n=12) andcontrols (n=8) were quantified after 30 min of incubation. Phagocytosis was similar in both groups but intracellular Killing of Candida tropicalis was significativily lower in patients (p<0.001). We concluded that our study showed an in vitro defect in the intracellular Killing function of monocytes in subjects in remission many years after diagnosis of Whipple's disease. The defective function did not seem to be related to relapse or to the susceptibility to other infections.

Estudios funcionales y producción de citoquinas en talasemia mayor / Functional study and cytokines production in major thalassaemia

En estudios previos demostramos diversos defectos en las funciones efectoras y regulatorias en células inmunocompetentes de pacientes con talasemia mayor. El objetivo de este trabajo fue completar el análisis de una de ellas, los fagocitos, estudiando la quimiotaxis de polimorfonucleares neutrófilos y de la producción de diversas citoquinas involucradas en la activación de los fagocitos. En 13 pacientes con talasemia mayor demostramos una menor capacidad de migración hacia un gradiente del péptido FMP, unanálogo de los péptidos bacterianos. Los pacientes tenían una producción espontánea de interferón y factor de necrosis tumoral (TNF), medidos por ensayo biológico, en los sobrenadantes de cultivos leucocitarios, al tiempo que al menos el TNF también podía encontrarse espontáneamente en el suero de los pacientes (medido por ELISA). Por el contrario, la producción de estas citoquinas gatillada por la estimulación con concanavalina A estaba disminuida. Estos resultados son compatibles con un estado de preactivación del sistema inmune, tal vez por la sobrecarga transfusional,seguida de una menor capacidad de respuesta a estímulos como los mitógenos.

Estudios inmunológicos en la enfermedad de Hodgkin / Immunologic studies in the hodgkin's disease

Se estudiaron las poblaciones linfocitarias presentes en ganglios linfáticos de 32 pacientes con enfermedad de Hodgkin, 45 adenitis reactivas y 82 linfomas no-Hodgkin. Se encontró que en los linfomas no-Hodgkin existía una población monoclonal predominante (T o B) en la mayoría de los casos, aunque también existían linfomas "nulos" (sin ningún marcador característico). En cambio, en enfermedad de Hodgkin había una población policlonal, parecida a las adenitis reactivas, pero con mayor cantidad de linfocitos CD4+, lo que llevaba a una relación CD4/CD8 de aproximadamente 3. En los estudios funcionales, la medición de las funciones citotóxicas NK y ADCC en células mononucleares sanguíneas de pacientes con enfermedad de Hodgkin fue normal, así como la cantidad de células efectoras. Concluimos que en la enfermedad de Hodgkin parte del compromiso inmunológico se debe a atrapamiento de linfocitos CD4 en ganglios linfático y que al menos una función no mediada por CD4, la citotoxicidad NK está conservada en sangre periférica

Inmunopatología del SIDA / Immunopathology of AIDS

El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) es un retrovirus, que exhibe tropismo selectivo por células del sistema inmunológico. Tiene acceso al interior celular mediante la molécula CD4, presente fundamentalmente sobre los linfocitos T colaboradores. La unión se da por interacción entre el CD4 y una glicoproteína de la cápside viral, la gp120. La infección de la célula es irreversible, ya que el material genético viral se incorpora, en forma de provirus, el genoma de la célula huésped, donde puede permanecer en estado latente durante un período de tiempo que varía entre unos meses y varios años. La activación del provirus se da en forma conjunta con la activación celular, lleva a la producción elevada de partículas virales. El hecho más significativo es la disminución de células T CD4+ atribuido, al menos en parte, al efecto citopático del virus. De la población total de linfocitos CD4+, solo un pequeño número es susceptible de infección viral, lo cual dificulta la interpretación de su marcada disminución. Teniendo en cuenta que el blanco preferido del virus es una célula central dentro del sistema inmune, puede comprenderse la amplia gama de alteraciones inmunológicas, que presentan los individuos infectados, que lleva a la severa inmunodeficiencia observada en los pacientes con SIDA

Evaluación clínica-inmunológica del tratamiento con Tp-5 en sujetos infectados con HIV / Clinical immunological evaluation of the treatment with tp-5 in subjects infected with HIV

We studied the effect of Tp-5 treatment on the immune system of 15 HIV+ males. The control groups consisted of 7 asymphtomatic HIV+ homosexual men and 33 health individuals. At the time of admission, the HIV+ subjects showed a significant decrease in the number of CD4+ T-cell and an increase in CD8+ cell when compared to normal controls. During Tp-5 treatment, 4 out of 15 of the HIV infected individuals expressed a transient increase of the CD4+ lymphocyte subpopulation. The number of CD8+ subset was not modified by the pentapepotide. The ability of pokeweed mitogen driven B lymphocytes to differentiate into plasma cell, already significantly low at admission, persisted without change at the end of the treatment. Thus, Tp-5 was not able to restore B-lynphocyte function. The T-lymphocyte PHA proliferative response of T-lymphocytes of HIV infected individuals did not differ from normal controls and no variation was observed after 3 months of the Tp-5 therapy. Nevertheless, the delayed skin reactivity to the 7 antigens tested, increased in 5 out of 9 patients, suggesting a partial restoration of T cell immunity by Tp-5. We conclude that Tp-5 in vivo can induce a transient partial variation at the T lymphocyte level in HIV infected patients